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    非洲猪瘟综合防控新思路
作者:bioob  更新日期:2019-04-19 21:48    点击次数:
截至3月28日,我国28个省直辖市报道114起疫情,目前仅海南、新疆和西藏未报道,进入3月后官方公布了3起疫情,但当下疫情压力依然存在。非洲猪瘟的系统防控要做到“快、准、狠”,即尽快发现异常、尽早判定、迅速应变,这需要临床快速检测技术。
 
2019年1月23日农业农村部公告130号发布了非洲猪瘟荧光PCR检测试剂盒新兽药证书,这是目前唯一批准使用的快检试剂盒,虽然在1月4日多家单位对11家检测试剂进行评价,但这些至今尚无批准文号,只能在应急期间用于动物检疫中对生猪及其产品检测,使用期限为6月30日。
 
2019年1月24日农业农村部颁发了农牧发[2019]5号《非洲猪瘟疫情应急实施方案(2019年版)》,对非洲猪瘟检测做出了明确规定。附件1《非洲猪瘟诊断规范》中指出,抗体检测采用间接Elisa、阻断Elisa和间接荧光抗体试验(IFA)等方法,病原学快检采用双抗夹心Elisa、PCR和实时荧光PCR等方法。
 
 
并在附件2《非洲猪瘟样品采集、运输与保存要求》中采集血清样品做抗体检测,病原学样品主要包括抗凝血、脾脏、扁桃体、淋巴结、肾脏、骨髓以及环境中的钝缘软蜱,组织样品首选脾脏,其次为扁桃体、淋巴结、肾脏、骨髓。因为脾脏和扁桃体病毒含量最高,骨髓可用于死亡野猪病例,因骨髓是唯一相对保存完好的组织。而FAO手册中检测组织还有肝脏、心脏、肺脏和关节液,关节液可用于检查低毒力毒株。
 
关于血样处理,做病原检测时新鲜血液尽快上机检测,若血样需要保存(冷藏运输、-70℃保存)必须做抗凝处理,使用EDTA(紫色盖)采血管。若猪已死亡,为避免死猪完全凝血,尽快从心脏处采血,但要加强解剖环境消毒,不宜在土壤或木板直接解剖,以免造成环境散毒。同时,不能使用肝素(绿色盖)抗凝,因为其抑制PCR反应而造成假阴性,且不能用于红细胞吸附试验(HAD),会造成假阳性。做抗体检测时应采集血清,使用未加抗凝剂(红色盖)采血管,离心后取上清液冷藏运输,-20℃保存。若血清发生溶血,可能会使Elisa实验产生假阳性,所以对死亡动物采血应尽快检测,因其更容易发生溶血。
 
所以,血样抗体检测最好使用无溶血的血清,血样抗原检测使用EDTA抗凝血。采用血样检测时应根据疫病感染期选择抗原或者抗体检测。感染期不同,体内抗原和抗体含量不同,具体规律如下图。
 
 
 
ASF自然感染潜伏期为3-23天,在临床症状出现前两天,ASF感染动物开始大量散毒,其速度因毒力不同而异,感染后约7-9天血清病原转阳,且可持续终生,但部分耐受猪(5-10%)后期带毒量不大。
 
而抗体一般在感染后12天左右产生,若急性发病,机体可能还没来得及产生抗体就已经死亡,这导致死猪采血抗体检测阴性也不能保证未感染。若检测抗体阳性表明已经感染,这种情况也适用于耐受猪,这些猪可能终身保持血清抗体阳性。
 
所以活体确诊必须要经过血样病原PCR检测,最好同时检测血液中的抗原和抗体以确保准确性。而发病猪(处死后)或死亡猪用密封袋密封,在实验室或者密闭空间解剖采样,防止散毒,同时采集脾脏、淋巴结等组织样和血样检测病原和抗体。组织样用PCR测定病原核酸,血样分别制成抗凝血(测病原)和血清(测抗体)。死亡时间长的猪因容易发生凝血和溶血,直接检测脾脏和淋巴结中的病原。
 
以上检测活动应按国家要求到指定实验室进行,可以购买快检试纸条检测,但其检测敏感性低,漏检率高,若检出阳性及时采样送检,不建议私下进行ELISA或PCR检测,样品采样、储存、运输均按照相应文件要求。
 

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