一例猪流行性腹泻病的诊断与治疗

　　猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的猪病毒性腹泻疫病，是严重危害养猪业的重要疫病之一，给世界各国的养猪业造成了巨大经济损失。2014 年2 月，山东惠民县某养猪场发生了以哺乳仔猪水样腹泻、并伴有呕吐等特征的疑似猪流行性腹泻疾病，现将诊治过程报告如下。

　　1、发病情况2014 年2 月初发现有哺乳仔猪（3 ～ 21 日龄）呕吐、腹泻、脱水。同圈仔猪发病率达100%，不同圈发病仔猪死亡率在11.1% ～ 30.0%。用抗生素治疗无效。

　　2、临床症状发病哺乳仔猪普遍精神沉郁，食欲下降，水样腹泻、个别仔猪伴有呕吐，仔猪普遍偏瘦，但体温正常。

　　3、病理变化剖检病死仔猪发现：小肠扩张、肠壁变薄，肠内充满黄色液体，肠系膜淋巴结水肿。

　　4、病毒分离鉴定4.1 病料采集取病死仔猪小肠黏膜、内容物及水样腹泻粪便作为分离病毒的样品，将样品冷冻保存。4.2 病料处理将采集的样品用灭菌PBS 研磨，反复冻融，在4 ℃条件下3 000 r/min离心30 min、吸取上清，将上清液用0.22μm一次性滤器过滤除菌、分装保存于-80 ℃备用。

　　5、病毒的RT-PCR 鉴定5.1 引物设计根据GenBank JN825712.1 序列设计，扩增长度661 bp，用于鉴定猪流行性腹泻病毒。引物序列如下：上游引物：CGGTTCTATTCCCGTT下游引物：GAAGCACTTTCTCACTATC5.2 病毒的RT-PCR提取病料的RNA， 并同时提取PEDV阴性对照（ 细胞培养液） 及PEDV 阳性细胞毒的RNA。病毒RNA用宝生物工程( 大连) 有限公司提供的RNA提取试剂盒提取，一步法RTPCR反应成分及反应程序如下。RT-PCR 反应体系为：10×Buffer5μL，MgCl2(25 mmol/L) 10μL，dNTPs(10 mmol/L) 5μL，Rna s e I n h i b i t o r ( 4 0 U/μL) 1μL，AM V R T a s e X L ( 5 u / μ L ) 1 μ L ，AMV-OptimizedTaq(5 U/μL) 1μL，上游引物P1（20μmol/L）1μL， 下游引物P2（20μmol/L）1μL ，模板5μL，RNase Free ddH2Oup to 50μL。RT-PCR 反应条件为：50 ℃反转录1 h ；94 ℃ 5 min ；进入PCR 循环，94℃ 45 S，55 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，35 个循环后，72 ℃延伸10 min。反应结束后，用0.8% 琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。5.3 病毒的RT-PCR 鉴定结果琼脂糖凝胶电泳检测显示，病毒的RT-PCR 扩增产物大小约660 bp，与预期一致（如图1 所示）。回收RTPCR产物，送往上海生物工程有限公司测序。测序结果与GenBank 上报道的猪流行性腹泻病毒序列同源性在96%～ 99% 之间。

　　6、治疗措施经上述诊断确认病原为猪流行性腹泻病毒。

　　建议该养猪场采取如下措施：6.1 保温及消毒措施建议保持猪舍温度高于正常温度1 ～ 2 ℃；保持猪舍卫生整洁及全面、定期消毒。6.2 补液，防止脱水措施可以购买正规厂家的优质口服补液盐，让发病猪群普遍饮用。6.3 防止继发细菌感染可用痢菌净防止细菌感染。6.4 高免血清疗法对发病仔猪采用高免血清被动治疗方法。采集发病猪群中痊愈后老母猪血液，制备高免血清：分离血清（注意无菌操作），在血清中添加一定比例的阿莫西林抗生素。按照仔猪体重，肌肉注射高免血清（建议0.5 mL/kg，1 次/d，连用2 次）。6.5 疫苗接种建议对全场猪群紧急免疫猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联活疫苗。高免血清治愈的发病仔猪猪群1 周后进行疫苗接种。该养猪场按照上述治疗措施进行了操作，发病猪群死亡率及发病率大幅降低。实施2 周后病情基本缓解，猪场进入稳定状态。7、小结自2011 年以来，猪腹泻病成为严重危害养猪行业的重大传染病，给养猪业造成巨大经济损失。专家证实猪流行性腹泻病毒是猪腹泻病的主要病原之一。笔者在收到山东惠民某猪场暴发疑似猪流行性腹泻病的疫情后，通过发病情况调查、临床观察及病理剖检，初步判断疫情为猪流行性腹泻引起。收集病料进行病毒分离及RTPCR鉴定，证实病原为猪流行性腹泻病毒。并按照猪流行性腹泻疫情采取防治措施，经过保温、消毒、补液、防继发感染及紧急免疫接种，疫情得到有效控制。